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对人参皂苷对照品进行定性和理化鉴别

日期:2019-01-10浏览:168次

   对人参皂苷对照品进行定性和理化鉴别
  由于人参皂苷Rh2的抗癌机制与传统药物不同,它不具有细胞毒性,不直接杀伤癌细胞,也不会伤害正常细胞,而是通过对癌细胞的分化诱导来实现抑制癌细胞增殖、改变癌细胞功能,随着人参皂苷Rh2浓度的升高,黑色素瘤B16细胞存活率逐步下降,经人参皂苷Rh2处理的B16黑色素瘤细胞穿越小室的细胞数明显减少,并呈剂量效应关系。已有研究显示,黑色素瘤与基底膜的黏附作用受与层粘连蛋白(LN)受体a6、B4等的影响。而人参皂苷Rh2能够通过影响这些粘连蛋白,来减少肿瘤细胞侵袭转移的能力。
  人参皂苷对照品含量测定鉴定
  1.定性鉴别:
  ①取样品1~2mg,置白瓷板上,加4%硫酸溶液4滴,逐渐变为橙黄色至橙红色。
  ②取样品1g,加水10ml,搅拌溶解,分为2等份,取一份置试管中,强力振摇,产生持久性泡沫,一份加稀H2SO4,即生成大量沉淀,再加过量氨溶液沉淀又复溶解。
  2.定量鉴别:
  取样品6g,到万分之一,加蒸馏水50ml溶解后,移于100ml容量瓶中,用乙醇稀释到刻度,搅匀,静置12h,用吸液管取上清液25ml,置烧杯中,加氨试液3滴,置水浴上蒸发至稠膏状,加水30ml溶解,缓慢加入3%盐酸5ml,在冰水中静置30min左右,过滤,沉淀物用冰水洗涤4次,每次用冰水5ml,弃去洗液及滤液,收沉淀物在滤纸上放置2~3h后,干燥称重。
  遇光颜色转深。有苦味。熔点177~178℃。于95~97℃下干燥则成两分子结晶水物。于110℃真空(1.33×103Pa)下干燥12h后成无水物。无水物易潮解,熔点190~192℃,在大气中可吸收2.5分子的水。于冷水中溶解度为0.012%,热水中溶解度为5%。微溶于乙醇。
  人参皂苷对照品理化鉴别:
  1.试管反应:本品乙醇浸液,滴加三氯化锑lv仿饱和溶液,显紫色(检查人参皂甙).
  2.薄层层析:
  样品液取本品粉末1g,加lv仿40ml,置水浴上回流1小时,弃去lv仿液,药渣挥干残存溶剂,加水0.5ml拌匀湿润后,加水饱和的正丁醇10ml,超声处理30分钟,吸取上清液,加氨试液3倍量,摇匀,放置分层,取上层液蒸干加甲醇溶解,使成1ml.对照品液取人参皂甙Rb1、Re、Rg1,加甲醇溶解,使成2mg/ml的混合溶液.展开硅胶G自制板,厚度0.5cm;点样1~2ml.以lv仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置后的下层溶液为展开剂,上行展开12~14cm.显色喷硫酸乙醇溶液(110),105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下观察,样品与对照品在相同位置显相同色斑.
  3.DNA分子遗传标记鉴定:用RAPD、DNA测序等方法鉴定人参、西洋参DNA测序:Fushimi等对人参属3种植物人参、西洋参和竹节参药材以及相关新鲜材料,采用18S-rRNA基因片断通用引物对18SF和18SR,通过PCR扩增,结果得到了约1.8kb片段的PCR产物.经过DNA测序发现3种药材间的18S-rRNA基因片断上第497、499、501和712号核苷酸序列不同,可用来鉴别人参及其相关药材.进一步采用matK基因片断通用引物对matKAF和matK8R,经过DNA测序发现西洋参与人参、竹节参间的matK基因片断上核苷酸序列差异可用来鉴别人参与西洋参.

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